作者：朱星莼
2025-04-03
脂滴表面蛋白 🦢 抽 🕷 提 🌷
材料：含脂滴的样品（例如，细胞 🐛 、组织）
蛋白酶抑制剂鸡尾酒 🦢
蔗糖 ☘ 溶液（30% 和 🐘 50%）
乙醚盐酸 🌳 （HCl，1 M）
三氯 🐯 乙酸（TCA，10%）
有机溶 🌹 剂（例 🦉 如，氯仿或甲醇）
室 🪴 温离心机 🐠
超 🌺 速离 🐯 心机 🐶
步骤：1. 匀浆和离 🐯 心
将样品匀浆于含蛋白 🐱 酶抑制剂鸡尾酒 🐋 的蔗糖溶液中。
在室温离心 🦊 （例如 🐠 ，1,000 x g，30 分钟）以除去细胞碎片。
2. 浮力梯 🐼 度离心 🌺
将上清液分层到蔗糖梯度（例如蔗糖上 🐵 ，3050% ）。
在超速离心 🌿 机中离心 🌹 （例如，100,000 x g，90 分钟 🌻 ）以分离脂滴。
3. 洗 🐼 涤 🐼 和收集脂滴馏分
收集含有脂滴的甘蔗梯度带 🐋 。
用蔗糖溶液洗涤脂滴颗粒以去除 🕸 残留的蔗糖。
在室温离 🐋 心（例如，10,000 x g，20 分钟 🦊 ）以 🦁 沉淀脂滴。
4. 蛋 🦟 白质变 💮 性
将脂滴沉 🦉 淀 🦟 物溶解 🐘 于乙醚中。
加 🦊 入 1 M HCl 酸化溶液 🐘 。
在室温孵 🪴 育 30 分钟以变性蛋白质。
5. 蛋白质沉 🐅 淀
加 🐼 入 10% TCA 溶 🌹 液 🌿 沉淀蛋白质。
在室 🌺 温孵育 🦟 30 分 🐘 钟。
6. 离心 🐦 和洗涤
在室温离心（例如 🐶 ，10,000 x g，15 分 🪴 钟）以沉淀蛋 🦁 白质。
用有机溶剂 🐞 洗涤蛋白 🐺 质沉淀物以去除 TCA 和脂质 🕊 。
7. 重 🦋 悬和定量 🐺
将蛋白质 🐼 沉淀物 🐘 重悬于缓冲液中。
测 🍀 量蛋白质浓度 🌷 （例如，使用 Bradford 试剂）。
提示：优化蛋 🐴 白酶抑制 🐘 剂鸡尾酒以 🌹 防止蛋白质降解。
使用超纯蔗糖以避 🌲 免样品污 🦟 染。
将脂滴沉淀物 🐴 彻底洗 🦄 涤以去除残留物。
选择合适的重悬缓冲液 🌻 以确保蛋白质稳定性。
脂肪 💐 蛋白提取试剂盒
产品简介脂肪蛋白提取试剂盒是一种预先配 🐅 制 🦄 好的溶液，专，为从多种样品中提取脂肪蛋白而设计包括：
组织该试剂盒利用一种温和的去垢剂溶液将脂肪蛋白从细胞膜和其他细胞成分中分离出来该去垢剂溶液。不。会破坏 🐋 脂肪蛋白的结构和功能
步骤试剂盒提取过程通常涉及以下步 🌲 骤：
1. 样品裂解：将样品与裂解缓冲液混合，释放细胞内容物 🐯 。
2. 去垢剂处理：加入去垢剂溶 💮 液 🐱 ，提取脂肪蛋白 🌺 。
3. 离心离心：样品以沉淀细胞 🐕 碎片。
4. 收集上清液收 🐋 集：含脂 🐕 肪 🐅 蛋白的上清液。
应用脂肪蛋白提取试剂盒可用 🪴 于多 🕷 种应用 🐘 ，包括：
蛋白质印迹：检测特 🕸 异性 🌺 脂肪蛋白
免疫沉淀：富 🦟 集特定 🐶 的脂 🐅 肪蛋白
脂 🌾 质组：研究脂肪蛋白与脂质的相互 🌷 作用
疾病诊断：识 🌸 别疾病期 🐼 间脂肪蛋白的 🐠 变化
优点高 🌲 效提取提取：出高纯度的 🐬 脂肪蛋白 🐳 。
预先 🐦 配好：使用方便，无需进行额外的制备。
温和：不 🌳 会破坏脂肪蛋白的结构或功能。
广泛的适 🪴 用性：可用于各种样品类 ☘ 型。
注意事项使用 🦋 时请按照试剂 🌳 盒说明 🕊 进行操作。
去垢剂溶液可能具有腐蚀性，应采取适当的预 🐝 防 🐋 措施。
提取的脂 🦁 肪蛋白应立即使用或储存在适 🦄 当的缓冲液中 🐶 。
脂蛋 🌾 白测定方法
1. 定性方法 🐠
电泳法 🦉 ：脂蛋白在 🌷 电场中按其密度和电荷分离开来。
沉淀法：使用硫 🐈 酸镁或 🌸 磷钨酸沉淀脂蛋白。
2. 定量 🌻 方 🐎 法
a. 化 🐘 学法 🦟
Friedewald 法：通过测量甘油三酯、低密度脂蛋白 (LDL) 胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇 (HDL) 来计算极低密 🌺 度脂蛋白胆 🐦 固醇 (VLDL) 。
直接法：使 🐵 用试剂盒或酶促方法测量脂蛋白胆固醇。
b. 免 🌷 疫 🌴 法 🦁
酶联免疫吸附测定 (ELISA)：使 🐞 用抗脂蛋白抗体和酶偶联二 🌾 抗测量脂蛋白。
免疫比浊法：脂蛋白与抗脂蛋白抗体反应形成浊度浊度 🐼 与脂蛋 🌷 白 🪴 ，浓度成正比。
c. 凝胶 🌷 电泳法
脂蛋白酯酶 🌷 (LPE) 电泳酶：LPE 分解脂蛋白 🕊 中的甘油三酯，不同脂蛋白具有不同的 LPE 活性。
非变性聚丙烯酰胺凝 🌷 胶电泳 (PAGE)：脂蛋白在非变性条件下通过聚丙烯酰胺凝胶分离。
d. 超速离心 🐡 法
密度梯度超速 🐧 离心法：脂蛋白在密度梯度介质中 🐱 通过超速离心分离。
垂直转子超速离心法 🕊 ：脂蛋白在垂直转 🌻 子中通过超速离心分离 🐅 。
e. 流动室法 🐯
毛细管电泳：脂蛋白在 🐧 毛细管中通过电场作用 🕊 分离。
层析法：脂蛋白被分离通 🐅 过不同的层析介质，如凝胶过滤层析 🌵 或离子交换层析。
选择测定方法的考 🦟 虑因素
样 🕷 本类型和可用量
所需的灵敏度和准确度 🦅
成 🐎 本 🍀 和周转时 🐝 间
设备和专业知识的 🦅 可用性
脂滴提 🐵 取 🐺 试剂盒 🐎
用途脂滴提取试剂 🕷 盒是一种专门设计的试剂盒，用于从各种来源（如动物 🕊 组织、细、胞培养物血液）中提取脂滴脂滴是细胞。内。储存脂肪的细胞器
原理脂 🐒 滴提取试剂盒通常基 🐟 于 🦋 以下原理：
细胞裂 🕸 解 🐵 细胞：被裂解，释，放出细胞内容物包括脂滴。
脂滴分离脂滴：具有疏水性，而其他细胞成分大多为亲水性。试，剂。盒中含有试 🐬 剂可以使脂滴与其他成分分离
脂滴收 🌷 集：分离的脂滴随后通过离心或其他方法收集。
试剂盒组成脂滴提取 💐 试剂盒通常包 🐕 含以下 🐳 试剂：
细 🐯 胞裂解缓 🐼 冲液 🐼
脂滴分 🐈 离缓 🦊 冲液
离 🐘 心管或其他 🌳 收集容器
使用说明使用脂滴 🦊 提取试 🌷 剂盒具 🐼 有以下优点：
快速高效：试剂 🕷 盒提供了 🐠 一 🍀 种快速高效的方法来提取脂滴。
特异 🐺 性强：试剂盒专门针对脂滴，与其他细胞成分分离良好 🌿 。
易于操作：试剂盒通常提供一步 🐶 一步 🐘 的说明操作，简单易懂。
应用脂 🦆 滴提取试剂盒广泛用 🐼 于以下应用：
脂质代谢研 🐴 究
脂肪细 🦄 胞生 🍁 物学 🐅
脂肪相关疾病的 🦈 研究 🌳
食品科学
