作者：刘慈音
2025-02-13
流式细胞仪激光整形是通过光学元件对激光光束进行处理，以 🐈 获得所需的特性。这些光学元件可以改变光束的形状、发，散。角和波长从而满足特定的实验要求
流式细胞仪中 ☘ 常用的激 🌿 光整形方法 🐦 有：
1. 聚 🦅 焦 🐱 透镜 🐈 ：
将发散的激光光束聚焦成一 🦆 个狭 🌵 窄 🦉 的光束，提高激光能量密度。
可用于激发荧光染料或散射颗粒，增强 🦋 信 🐺 号强度。
2. 准直透 🐺 镜：
将发散的激光光束整形 💮 为平行光束，减少光束发散。
适用于需要均匀照射的应用，例如 🦈 细胞排序或多通道检测 🐕 。
3. 光 🌾 栅：
将激光光束中不 🐡 同波长 🕸 的光分离成 🌷 不同的光束。
可用于多色激 🦈 发 💮 或荧光补偿 🦍 。
4. 棱 🐦 镜 🐎 ：
将激光光束偏转或转向，用于调整光路 🌸 或隔离特定波长。
5. 光 🌼 纤 🐵 ：
将激光光束传输到难以直接照射 🌷 到的区 🐋 域。
可用于流式细胞分级的侧照 🐯 或低 ☘ 角照明。
激光整形在流式细胞仪中至关重要，因，为它可以优化光 🦈 束特性提高测量精度和灵敏度。通，过，使 🍁 。用这些光学元件可以根据不同的实验需求对激光光束进行整形从而获得最佳的检 🐝 测效果
Alexa Fluor 647
Cy5Cy5.5
PETexas Red
APC远 🌾 红外荧光 🐵 团
Alexa Fluor 660
Cy5.5
Cy7APCCy7
PECy7
选择建议：选择 🐋 激发波长 🌺 最接近633nm的荧光团，以最大化激发效率。
考虑荧光团的亮度和光稳定性，以获得最佳信号强 🦋 度和减少光漂白。
了解可能出现的光 🐋 谱重叠，并使用适当的 🐧 补偿控制来消除 🐟 信号干扰。
流式细胞仪激 🐞 光整形 🐡 视 🌳 频的步骤如下：
1. 获取原始视频 🦈 数 🦄 据 🕸
使用流式细 🌵 胞仪收集 🐬 原始散射 🐅 和荧光数据。
数据 💮 通常存储在 FCS 或 LMD 文件格式 🦊 中。
2. 预处 🌺 理数据
将 FCS 或 LMD 文件加 💐 载 🐧 到流式细胞仪分析软件中 🐒 。
进行 🐯 补偿 🍀 以校正光 🐧 谱重叠。
门控 🐟 事件以去除噪声和碎片。
3. 选择 🌹 激光整形 🦍 参数
确定要 🍁 使用 🦋 的整 🐧 形参数，例如：
灵敏度：激 🐺 光强度
聚焦 🌼 ：光束大 🦢 小
偏转：光束中心 🐘
模 🌿 式：连续或 🐅 脉冲 🌹
4. 调节 🐘 激光参数 🐝
根据特定样本和实验 🍁 目的优化激光 🦉 参数。
使用 🐎 试错法或参考 🦊 已知样本来 🐶 找到最佳设置。
5. 应用 🐞 激光 🐋 整形
一旦确定了最佳参数，就 🕸 可以应 🌺 用激 🕸 光整形。
软件会使 🐳 用激光整形算 🐴 法修改原始 🐎 数据。
6. 后 🍁 处理数据
对整 🐬 形后的数据执行进一步分析。
例如，可 🐕 以生 🐡 成 🌼 散点图、直方图和统计报告。
视 🦍 频 🌴 整形的好处：
提高数据分辨度和信噪 🐵 比
增 🦍 强细胞亚群的可 🐦 视化和区分度
减少背 🐳 景噪 🌲 声并补偿光谱重叠
简化数据分析和 ☘ 解释 🐧
流式细胞 🌾 仪 🍁 激 🐞 光整形
流式细胞仪是一种用于测量和分离细胞群的仪器 🌿 。它使用激光束 🐅 作为光源，该。激光束需要整形以实现特定功能
激光的整 🌴 形方法 🦆
有几种方法可以整形激 🐯 光束：
聚焦透镜：使用聚焦透镜将激光束聚焦到一个点或线，从而 🦆 增 🐡 加其强度和分辨率。
准直器：使用 🌸 准直器将激光束校准为 🦋 平行的路径，从而减少散射和衍射。
滤光器：使用滤光器隔离所 🐡 需 🌺 波长的激光 🍀 光，从而消除不必要的背景噪声。
衰减 🦄 器 🌻 ：使用衰减器减弱激 🦋 光束的强度，防止损坏敏感的生物样本。
反射镜：使 🦊 用反射镜将激光束引导至所需路径，或将其反射回自身以增加激发效率。
激光 💮 的整 🐛 形用途 🍀
激光整形在流式细胞仪中具有 🦟 以下用途：
激发荧光激光光：与细胞中的荧光 🪴 标记分子相互 🌺 作用激发，它，们并释放出特定波长的光从而可以检测和定量细胞标记物。
散射测量 🌻 ：激光散射可以提供有关细 🌷 胞大小和复杂性的信息。
分离细胞：激 🦈 光束可以被调制以在特定阈值处分 🐧 离不同 🦈 群体的细胞。
触 🦍 发检测：激 🦈 光脉冲可以触发检测器以测量荧光或散射事件。
减少背景噪声：通过滤光和准直，可，以最大程度地减少激光束中不需 🐱 要的波长和散射从而提高数据质量。
具体应用激光整形在流式细胞 🌿 仪中 🌼 用于各种应用，包 🐠 括：
细胞 🌵 表 🌴 型 🌲 分析
细胞计 🐧 数和 🦊 分类 🦋
细胞排序细胞 🌷 活 🐧 性分析
病原 💮 体检测 🦋
通过整形激 🐴 光束，流，式细胞仪能够精确地测量和操纵细胞为研究和临床诊断提供有价值的信息。
